Centro Ricerche Oncologiche Mercogliano - CROM > Piattaforma Proteomica

La piattaforma di proteomica per elettroforesi bidimensionale (2DE) presente presso il Laboratorio di Farmacologia e Proteomica, consente l’analisi simultanea di migliaia di proteine ed è utilizzata principalmente per studi di tipo comparativi. E’ possibile, infatti, paragonare, da un punto di vista sia qualitativo sia quantitativo, i profili di espressione dei “proteomi” di una stessa cellula o di uno stesso organismo, in diverse condizioni. Nelle applicazioni biomediche un’analisi di tipo comparativo è utilizzata per identificare quelle proteine, i cui livelli di espressione si mostrano alterati in un fenotipo patologico al fine di definire nuovi marcatori diagnostici o bersagli terapeutici. La tecnica analitica d’elezione per studi di tipo comparativo è la 2DE, che separa le proteine di miscele complesse mediante due proprietà intrinseche, quali punti isoelettrici e peso molecolare grazie alle quali è possibile assegnare ad ogni molecola proteica una posizione all’interno di una mappa definita “proteomica”. In particolare, la piattaforma definita “2D DIGE” (Differential Gel Electrophoresis) conferisce agli studi di proteomica comparativa una maggiore accuratezza e sensibilità in quanto le proteine vengono marcate con coloranti fluorescenti e rilevate mediante uno scanner costituito da tre laser  ad alta sensibilità (Typhoon TRIO). Le immagini prodotte sono analizzate mediante il software Decyder 7.2, corredato da un potente modulo statistico che garantisce l’accuratezza dei dati raccolti. Infine, mediante un sistema completamente automatizzato (Spot Picker) le proteine d’interesse sono eluite dalle mappe proteomiche per essere così analizzate mediante spettrometria di massa per la loro identificazione.